Esse ABTS
Tā ir analītiska metode, kas izmanto spektrofotometrisko mērījumu, lai noteiktu parauga antioksidantu jaudu. Izmantojot UV-Vis spektrofotometru, izmēra šķīduma, kas satur ABTS + +, absorbciju, kas iegūta, oksidējot ABST (2, 2'-azinobis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonāts), bezkrāsainu vielu formā radikāļi ir iekrāsoti, absorbējot viļņu garuma raksturlielumus redzamā diapazonā Antioksidantu molekulu ABTS + + šķīduma pievienošana, kas var iedarboties, pārvietojot gan ūdeņradi, gan elektronu, nosaka radikālas reducēšanos uz bezkrāsainu formu, \ t ar sekojošu reakcijas maisījuma krāsas maiņu. Šo balināšanu, kas ir proporcionāla esošā antioksidanta daudzumam, var izmērīt kā absorbcijas samazināšanos noteiktā laikā noteiktā viļņa garumā (734 nm). Antioksidantu jauda ir izteikta, salīdzinot ar absorbcijas vērtības, kas izmērītas par zināmu daudzumu antioksidanta molekulas, kas izvēlēta par standartstandartu, kas parasti ir askorbīnskābe vai Trolox (šajā gadījumā mēs runājam par TEAC Trolox ekvivalento antioksidantu jaudas antioksidantu aktivitāti.
Antioksidanta jaudas mērījumiem, kas balstīti uz ABTS izmantošanu, ir priekšrocība, ka tā ir vienkārša un ātra. Turklāt tas ļauj izmērīt antioksidantu vielas gan hidrofilās, gan lipofīlās plašā pH diapazonā. Tomēr jāpatur prātā, ka izmantotais radikāls (ABTS + +) nav fizioloģisks un nav sastopams bioloģiskajās sistēmās un ka bieži tiek uzsvērta dažādu atkārtotu antioksidantu reakcijas kinētikas mērījumu atkārtojamības problēmas.
FRAP (dzelzs samazināšanas antioksidantu jauda)
FRAP tests nosaka antioksidantu spējas samazināt dzelzs jonus. Tā ir metode, kas balstīta uz elektronu pārnesi, kurā dzelzs joni pāriet no Fe3 + uz Fe2 +. Noteiktos pH (3.6.) Un TPTZ (2, 4, 6-tris (2-piridil) -s-triazīna) klātbūtnē šie joni veido kompleksus ar atšķirīgām īpašībām, īpaši samazinātu atvasinājumu (Fe2 + -TPTZ) pieņem zilo krāsu, kuras maksimālā absorbcija ir 593 nm, ko var izmērīt spektrofotometriski. Tādēļ antioksidanta vielas reducējošo spēju var izmērīt kā oksidētāju saturošā šķīduma absorbcijas izmaiņas viļņa garumā, kas noteikts, salīdzinot ar izmaiņām attiecībā pret standartu (piemēram, askorbīnskābi).
FRAP tests tika izstrādāts, lai izmērītu plazmas reducējošo jaudu, bet pēc tam tika pielāgots, lai pārbaudītu tīru savienojumu un komplekso matricu antioksidantu spēju. Faktiski, tā kā šī metode ļauj novērtēt tikai samazinošo jaudu ar elektronu pārnesi, pilnībā ignorējot antioksidantu darbību, kas darbojas ar ūdeņraža pārnesi, tas neļauj izmērīt molekulu, piemēram, tiolu un olbaltumvielu, ieguldījumu, kas spēlē antioksidantu lomu. bioloģiskos šķidrumos (piemēram, asinīs). Šīs metodes izmantošanas priekšrocība ir tā, ka tā ir viena no vienkāršākajām, ātrākajām un lētākajām metodēm, lai noteiktu antioksidantu kapacitāti in vitro.
DPPH TESTS
2, 2-difenil-1-pikilhidrazils (DPPH •) ir ļoti stabils un komerciāli pieejams slāpekļa radikāls, kam raksturīga intensīva purpura sarkana krāsa, kas pazūd, samazinot molekulu ar antioksidantu spēju. Spektrofotometriski mērot DPPH šķīduma absorbcijas izmaiņas pie 517 nm, pēc reakcijas ar antioksidanta savienojumu, ir iespējams kvantitatīvi noteikt testa vielas reducējošo jaudu, vai tas darbojas ar ūdeņraža pārnesi vai elektronu pārnesi. Rezultātu parasti izsaka kā IC50, ti, antioksidanta daudzumu, kas spēj samazināt sākotnējo DPPH koncentrāciju par 50%.
Tā ir ātra, vienkārša un lēta metode. Šīs analītiskās metodes robežas nosaka iespēja, ka analīzes rezultāti ir izkropļoti gadījumā, kad pārbaudāmās molekulas absorbē tādu pašu DPPH radikāļu viļņu garuma diapazonu vai lielas, stacionāli maldinātas molekulas, kas nav viņi reaģē ar radikālas reaktīvo daļu. Tas izraisa DPPH reakciju ar antioksidantiem līdz pat 1000 reizēm lēnāk nekā peroksilgrupas.
PCL TESTS (fotochemiluminiscence)
PCL tests pamatojas uz specifiskas radikāļu sugas reakciju, superoksīda anjonu (O2 • -), kas radīts fotokēmiski ar UV starojumu, ar savienojumu, kas spēj emitēt ķīmijuminiscenci. Izmantotais marķieris ir luminols, molekula, ko oksidē brīvie radikāļi, izstaro gaismu, ko var izmērīt, izmantojot īpašu instrumentu (Photochem®). Antioksidantu vielu klātbūtne barības maisījumā deaktivizē radikāļu sugas, kas kavē ķīmiluminescences emisiju. PCL analīze ir ļoti ātra un jutīga. Turklāt, izmantojot divus dažādus analītiskos protokolus, ko sauc par ACW (antioksidanta kapacitāte ūdenī šķīstošs) un ACL (antioksidanta kapacitāte Lipīds šķīstošs), var noteikt ūdens šķīduma komponenta (flavonoīdus, E vitamīnu) kopējo antioksidantu kapacitāti. C, aminoskābes utt.), Nekā liposšķīstošs (tokoferols, tokotrienols, karotinoīdi uc). Pārbaudāmā produkta antioksidantu jaudu iegūst, salīdzinot ar mērījumiem saistītās vērtības, kas saistītas ar standarta references molekulām, askorbīnskābi ACL protokolam un Trolox ACW protokolam.
